DNase I، خالي من RNase، عالي التركيز

التركيز: 50 وحدة/ميكرولتر

وصف المنتج
إنزيم DNase I (بدون RNase) هو إنزيم نووي داخلي يمكنه شطر كل من الحمض النووي أحادي السلسلة ومزدوج السلسلة. يقوم بتحليل الروابط الفوسفاتية الثنائية، منتجًا ديهوكسي ريبونوكليوتيدات أحادية وأوليغو ديهوكسي ريبونوكليوتيدات مع مجموعات فوسفات 5' ومجموعات OH-3'.
يعتمد نشاط هذا الإنزيم بشكل صارم على أيونات Ca2+ ويتم تنشيطه بواسطة أيونات Mg2+ أو Mn2+. بوجود Mg2+، يقطع DNase I كل سلسلة من الحمض النووي المزدوج (dsDNA) بطريقة إحصائية عشوائية ومستقلة. عند وجود Mn2+، يقطع الإنزيم تقريبًا كلتا سلسلتي الحمض النووي في نفس الموقع، مما يؤدي إلى شظايا الحمض النووي ذات نهايات غير متدرجة (blunt ends) أو متدلية من نيوكليوتيد واحد أو بضعة نيوكليوتيدات.

المصدر
سلالة E. coli مُعاد تركيبها تحتوي على الجين المستنسخ الذي يُشفر إنزيم DNase I البقري.

تعريف الوحدة

تُعرّف الوحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لتحليل 1 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي بالكامل خلال دقيقة واحدة عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإنزيم في الخليط التالي: 10 ملي مولار Tris-HCl (درجة حموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية)، 2.5 ملي مولار MgCl₂، 0.1 ملي مولار CaCl₂، و1 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19.

تُعادل وحدة واحدة من DNase I 0.3 وحدة كونيتز.

الميزات
- إنزيم مُعاد تركيبه
- مُنقى من مضيف غير حيواني، بمستويات منخفضة من RNase داخلي المنشأ

نطاق التطبيق
- لتحضير RNA خالٍ من الحمض النووي.
- لإزالة قالب الحمض النووي بعد النسخ في المختبر.
- لتحضير RNA خالٍ من الحمض النووي قبل RT-PCR و RT-qPCR.
- بالاشتراك مع بوليميراز الحمض النووي I لتوسيم الحمض النووي من خلال ترجمة النيك.
- لدراسة تفاعلات الحمض النووي والبروتين باستخدام DNase I (خالٍ من RNase).
- لتوليد مكتبة من شظايا إدخالات الحمض النووي المُشطورة عشوائيًا. يتم استخدام محلول التفاعل المحتوي على Mn2+.