Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (Low ROX+)

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (Low ROX+) هو مزيج مسبق التركيز 2X لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qPCR) باستخدام طريقة المسبار. عند الاستخدام، ما عليك سوى إضافة قالب الحمض النووي والبادئ والمسبار للتفاعل. يحتوي هذا المنتج على إنزيم Taq DNA polymerase المعدّل بتقنية الجسم المضاد Hotstart. بالاشتراك مع محلول GDSBio's الخاص بتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي، لا يمكنه فقط تثبيط ديمر البادئات والتضخيم غير المحدد الآخر بشكل فعال، بل يحسن أيضًا كفاءة التضخيم، مما يسمح بتفاعل qPCR متعدد المجسات. أدخل هذا الكاشف نظام dUTP/UDG المضاد للتلوث، والذي يمكنه إزالة منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل التي تحتوي على dUTP قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل، وبالتالي يتجنب بشكل فعال تأثير التلوث المتبادل لمنتجات التضخيم على التقدير الكمي. هذا المنتج مناسب للاستخدام مع TaqMan والبادئات لتحقيق مجموعة تشخيص جزيئية Master Mix مسبقة الخلط بالكامل، وهو متوافق تمامًا مع أجهزة qPCR الكمية الشائعة، مثل ABI وRoche وBio-Rad، إلخ. تم خلط المنتج مسبقًا بصبغة ROX المرجعية منخفضة التركيز، وهي مناسبة لأجهزة PCR الكمية الفلورية من ABI وRoche وغيرها التي تتطلب تركيزًا منخفضًا من ROX للمعايرة. يمكن استخدامه مع TaqMan ومجسات الفلورسنت الأخرى.

يمكن تحضير نظام التفاعل لهذا المنتج في درجة حرارة الغرفة دون الحاجة إلى صندوق ثلج. يمكن وضع نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل المحضر في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة وتبقى كفاءة التضخيم دون تغيير.

التطبيق
تحليل تعبير الجين باستخدام المسبار
الكشف عن جينات متعددة منخفضة النسخ
التحقق من صحة مصفوفة المسبار الدقيقة
التحقق من صحة إسكات الجينات باستخدام المسبار

الميزات
هذه المجموعة مناسبة للتقدير الكمي الفلوري المتعدد باستخدام طريقة المسبار
هذه المجموعة متوافقة مع العديد من أنظمة الوقت الفعلي التي تتطلب تركيزًا منخفضًا من ROX للمعايرة
تقنية Hot-start توفر خصوصية عالية وتضخيمًا قابلاً للتكرار
نظام dUTP/UDG، يمنع بشكل فعال تلوث منتج PCR

وضع التضخيم السريع المدعوم: وقت التشغيل أقل من 50 دقيقة، مع سيطرة على فقدان ∆Ct.

بيانات التحقق
باستخدام الحمض النووي الجينومي البشري (0.1 نانوغرام/ميكرولتر) كقالب، يتم إجراء الكشف عن الجينات من خلال Multiplex Probe qPCR Mix Plus U. يوضح الشكلان 1 و 2 منحنيات التضخيم المكتشفة بعد تحضير نظام التفاعل (0 ساعة) وبعد وضعه في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) لمدة 48 ساعة (48 ساعة)، على التوالي؛ في الوقت نفسه، يتم إجراء اختبار مقارن مع منتج مشابه للشركة المصنعة T، حيث يوضح الشكلان 3 و 4 منحنيات التضخيم لتجميع الشركة المصنعة T المكتمل في 0 ساعة و 48 ساعة، على التوالي. يوضح الجدول 2 قيم Ct لـ Multiplex Probe qPCR Mix Plus U والشركة المصنعة T في 0 ساعة و 48 ساعة. يمكن ملاحظة أنه بعد وضع النظام المُجمع مسبقًا في درجة حرارة الغرفة لمدة 48 ساعة، لا يزال Multiplex Probe qPCR Mix Plus U يتمتع بأداء تضخيم ممتاز.

استراتيجية تخصيص الهدف (توصية): في فحوصات PCR المتعددة، قم بتحسين تعيين القنوات لتعويض خسائر الحركية للدورات السريعة:

قناة ROX: خصص الجينات المستهدفة عالية الوفرة، أو عالية التعبير، أو التي لا تقع ضمن حد الكشف (LoD).

قنوات FAM أو CY5: احتفظ بها للأهداف الهشة، أو ذات النسخ المنخفضة جدًا. تظل هذه القنوات غير متأثرة تقريبًا بالبروتوكولات السريعة (∆Ct ~1).