T4 DNA Ligase

التركيز: 5 وايز وحدة/ميكرولتر

يحفز إنزيم T4 DNA Ligase تكوين الروابط الفوسفاتية ثنائية الإستر بين نهايات 5'-فوسفات و3'-هيدروكسيل المتجاورة في الحمض النووي المزدوج أو الحمض النووي الريبوزي. هذا الإنزيم قادر على إصلاح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج، والحمض النووي الريبوزي، أو الهجائن بين الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي، ويمكنه ربط شظايا الحمض النووي ذات النهايات اللاصقة أو الكليلة، ولكنه غير نشط على الأحماض النووية أحادية السلسلة.

يتطلب إنزيم T4 DNA Ligase وجود ATP كعامل مساعد.

المصدر
سلالة الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحتوي على الجين 30 المستنسخ من بكتيريا T4.

تعريف الوحدة

عند 37 درجة مئوية، تحفز وحدة وايز واحدة من الإنزيم تحويل 1 نانومول من [³²PPi] إلى حالة امتصاص كربون نشط في غضون 20 دقيقة.

يتم تحديد نشاط الإنزيم في الخليط التالي: 66 مللي مولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.6)، 6.6 مللي مولار MgCl₂، 0.066 مللي مولار ATP، 10 مللي مولار DTT، 3.3 ميكرومولار [³²P] أورثوفوسفات (PPi).

تُعادل وحدة وايز واحدة حوالي 200 وحدة ربط نهايات متماسكة (CEU)، وهي تُعادل عدد شظايا الحمض النووي التي يتم هضمها بواسطة HindIII والتي يمكن ربطها في غضون 30 دقيقة عند 16 درجة مئوية. شظايا الحمض النووي λ.

نطاق التطبيق
- شظايا الحمض النووي الناتجة عن إنزيمات التقييد المستنسخة
- منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المستنسخة
- ربط أوليغونوكليوتيدات مزدوجة السلسلة أو محولات بالحمض النووي
- الطفرات الموجهة للموقع
- تعدد أشكال طول الشظايا المضخمة (AFLP)
- الكشف عن الحمض النووي الريبوزي بوساطة إنزيم الليغاز
- إصلاح الشقوق في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبوزي، أو الهجائن بين الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي
- التدوير الذاتي للحمض النووي الخطي