T4 DNA Ligase, HC

التركيز: 30 وحدة فايس/ميكرولتر

يحفز إنزيم T4 DNA Ligase تكوين روابط الفسفودايستر بين نهايتي 5'-فوسفات و 3'-هيدروكسيل المتجاورتين في الحمض النووي المزدوج (DNA) أو الحمض النووي الريبوزي (RNA). هذا الإنزيم قادر على إصلاح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبوزي، أو الهجائن DNA/RNA، ويمكنه ربط شظايا الحمض النووي ذات الأطراف اللاصقة أو الكليلة، ولكنه غير نشط على الأحماض النووية أحادية السلسلة.

يتطلب إنزيم T4 DNA Ligase وجود ATP كعامل مساعد.

المصدر
سلالة الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحتوي على الجين 30 المستنسخ من العاثية T4.

تعريف الوحدة

عند 37 درجة مئوية، تحفز وحدة فايس واحدة من الإنزيم تحويل 1 نانومول من [³²PPi] إلى حالة امتصاص الكربون النشط في غضون 20 دقيقة.

يتم تحديد نشاط الإنزيم في الخليط التالي: 66 ميلي مولار تريس-كلوريد الهيدروجين (pH 7.6)، 6.6 ميلي مولار كلوريد المغنيسيوم، 0.066 ميلي مولار ATP، 10 ميلي مولار DTT، 3.3 ميكرو مولار [³²P]أورثوفوسفات (PPi).

تعادل وحدة فايس الواحدة تقريبًا 200 وحدة ربط نهاية متماسكة (CEU)، وهي ما يعادل عدد شظايا الحمض النووي المقطعة بواسطة HindIII التي يمكن ربطها في غضون 30 دقيقة عند 16 درجة مئوية. شظايا الحمض النووي λ.

نطاق التطبيق
- شظايا الحمض النووي الناتجة عن استنساخ إنزيمات التقييد
- منتجات PCR المستنسخة
- ربط الأوليهات أو المحولات مزدوجة السلسلة بالحمض النووي
- الطفرات الموجهة للموقع
- تعدد أشكال طول الشظايا المضخمة (AFLP)
- الكشف عن RNA بوساطة الليجيز
- إصلاح الشقوق في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبوزي، أو هجائن الحمض النووي/الريبوزي
- التدوير الذاتي للحمض النووي الخطي