T4 DNA Ligase, LC

التركيز: 1 وايس وحدة/ميكرولتر

يحفز إنزيم T4 DNA Ligase تكوين الروابط الفوسفاتية ثنائية الإستر بين نهايتي 5'-فوسفات و 3'-هيدروكسيل المتقابلتين في الحمض النووي المزدوج (DNA) أو الحمض النووي الريبوزي (RNA). هذا الإنزيم قادر على إصلاح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبوزي، أو الهجائن بين الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي، ويمكنه ربط أجزاء الحمض النووي ذات الأطراف اللزجة أو الملساء، ولكنه غير نشط على الأحماض النووية أحادية السلسلة.

يتطلب إنزيم T4 DNA Ligase وجود ATP كعامل مساعد.

المصدر
سلالة مُعدلة وراثيًا من بكتيريا الإشريكية القولونية (E. coli) تحتوي على الجين 30 المستنسخ من العاثية T4.

تعريف الوحدة

عند 37 درجة مئوية، تحفز وحدة وايس واحدة من الإنزيم تحويل 1 نانومول من [32PPi] إلى حالة امتصاص الكربون النشط خلال 20 دقيقة.

يتم تحديد نشاط الإنزيم في الخليط التالي: 66 ميليمولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.6)، 6.6 ميليمولار MgCl2، 0.066 ميليمولار ATP، 10 ميليمولار DTT، 3.3 ميكرومولار [32P] أورثوفوسفات (PPi).

تعادل وحدة وايس واحدة تقريبًا 200 وحدة ربط أطراف متماسكة (CEU)، وهي تعادل عدد شظايا الحمض النووي المقطوعة بواسطة HindIII التي يمكن ربطها في غضون 30 دقيقة عند 16 درجة مئوية. أجزاء الحمض النووي λ.

نطاق التطبيق
- أجزاء الحمض النووي الناتجة عن إنزيمات التقييد المستنسخة
- منتجات PCR المستنسخة
- ربط أوليغونوكليوتيدات أو محولات مزدوجة السلسلة بالحمض النووي
- الطفرات الموجهة بالموقع
- تعدد أشكال طول الأجزاء المكبرة (AFLP)
- الكشف عن الحمض النووي الريبوزي بوساطة إنزيم الربط
- إصلاح الشقوق في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبوزي، أو هجائن الحمض النووي/الحمض النووي الريبوزي
- التدوير الذاتي للحمض النووي الخطي