T4 RNA Ligase

التركيز: 10 وحدات/ميكرولتر 

يحفز إنزيم T4 RNA Ligase تكوين روابط الفسفوديستر المعتمدة على ATP بين مجموعات الفوسفات 5' ونهايات الهيدروكسيل 3' من قليل النوكليوتيدات، والحمض النووي الريبي (RNA) أحادي السلسلة، وجزيئات الحمض النووي (DNA) سواء بين الجزيئات أو داخل الجزيء.

الركائز الدنيا: نوكليوتيد 3',5'-فوسفات في التفاعلات بين الجزيئات و قليل نوكليوتيد من 8 نوكليوتيدات في التفاعلات داخل الجزيء.

المصدر
سلالة الإشريكية القولونية المؤتلفة تحتوي على الجين 63 المستنسخ من العاثية T4.

تعريف الوحدة

تُعرف الوحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لتحفيز تحويل 1 نانومول من 5'-[³²P]-(A)_12-18 إلى شكله المقاوم للحمض عند 37 درجة مئوية خلال 30 دقيقة.

يتم تحديد نشاط الإنزيم في الخليط التالي: 50 ملي مولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.5)، 10 ملي مولار MgCl₂، 10 ملي مولار DTT، 1 ملي مولار ATP، و 10 ميكرومولار 5'-[³²P]-(A)_12-18 (10 ميكرومولار عند الطرف 5').

نطاق التطبيق
- وسم الحمض النووي الريبوزي (RNA) الطرفي 3' (باستخدام سايتيدين 3',5'-ثنائي [α-³²P] فوسفات)
- ربط الحمض النووي الريبوزي (RNA) مع الحمض النووي الريبوزي (RNA)
- تخليق أوليغوريبونوكليوتيدات وأوليغوديوكسيريبونوكليوتيدات
- تعديل محدد للـ tRNA
- ربط الأوليغوديوكسينوكليوتيدات بالـ cDNA أحادي السلسلة لـ 5' RACE (التضخيم السريع لنهايات cDNA)
- التوليد المحدد للموقع لمركبات بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)