الفسفاتاز القلوي الحساس للحرارة

التركيز: 1 وحدة/ميكرولتر

الفسفاتاز القلوي الحساس للحرارة (Thermosensitive Alkaline Phosphatase) هو فسفاتاز قلوي جديد يُظهر نشاطًا في محاليل الإنزيمات المقيدة الشائعة الاستخدام، بالإضافة إلى محاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يحفز هذا الإنزيم إطلاق مجموعات الفوسفات 5' و 3' في الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) والنيوكليوتيدات. بالإضافة إلى ذلك، يمكنه إزالة مجموعات الفوسفات من البروتينات. يستطيع الفسفاتاز القلوي الحساس للحرارة إزالة الفسفرة من جميع أنواع نهايات الحمض النووي في غضون 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. يتم تعطيل الإنزيم بالحرارة عند 75 درجة مئوية في غضون 5 دقائق. وبالتالي، لا توجد حاجة لإزالة الفسفاتاز القلوي قبل عملية الربط.

المصدر
سلالة الإشريكية القولونية (E. coli) المؤتلفة التي تحتوي على جين الفسفاتاز القلوي المستنسخ من البكتيريا.

تعريف الوحدة
تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإزالة الفسفرة من النهايات 5' لـ 1 ميكروجرام من الحمض النووي pUC57 الخطي في محلول DSAP عند 37 درجة مئوية في غضون 10 دقائق.

نطاق التطبيق
- إزالة فسفرة الحمض النووي المتجه المستنسخ لمنع إعادة الدوران أثناء الربط.
- التكسير الإنزيمي المتزامن وإزالة الفسفرة من الحمض النووي المتجه.
- تنقية منتجات PCR: تحلل النيوكليوتيدات لمنتجات PCR قبل التسلسل.
- إزالة فسفرة النهايات 5' للأحماض النووية قبل الوسم بواسطة كيناز عديد النوكليوتيدات T4.
- تطبيقات أخرى تتطلب إزالة فسفرة ركائز الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA).
- إزالة فسفرة البروتينات.