كاشف ترايزول

يُعد كاشف TRAzol كاشفًا جاهزًا للاستخدام لعزل الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) من الخلايا والأنسجة. يُعد الكاشف، وهو محلول أحادي الطور من الفينول وثيوسيانات الغوانيدين، تحسينًا لطريقة عزل الحمض النووي الريبوزي أحادية الخطوة. أثناء تجانس العينة أو تحللها، يحافظ كاشف TRAzol على سلامة الحمض النووي الريبوزي، بينما يقوم بتفكيك الخلايا وإذابة مكوناتها. تؤدي إضافة الكلوروفورم ثم الطرد المركزي إلى فصل المحلول إلى طور مائي وطور عضوي. يبقى الحمض النووي الريبوزي حصريًا في الطور المائي. بعد نقل الطور المائي، يُستعاد الحمض النووي الريبوزي عن طريق الترسيب بكحول الأيزوبروبيل. بعد إزالة الطور المائي، يمكن استعادة الحمض النووي (DNA) والبروتينات في العينة عن طريق الترسيب المتسلسل. يؤدي الترسيب بالإيثانول إلى إنتاج الحمض النووي من الطبقة البينية، ويؤدي الترسيب الإضافي بكحول الأيزوبروبيل إلى إنتاج البروتينات من الطور العضوي.

قد يكون التنقية المشتركة للحمض النووي مفيدًا لتوحيد كميات الحمض النووي الريبوزي من عينة إلى أخرى. تعمل هذه التقنية جيدًا مع كميات صغيرة من الأنسجة (50-100 ملغ) والخلايا (5x10^6)، وكميات كبيرة من الأنسجة (>1 جم) والخلايا (>10^7) من أصل بشري أو حيواني أو نباتي أو بكتيري. تسمح بساطة طريقة كاشف TRAzol بمعالجة عدد كبير من العينات في وقت واحد. يمكن إكمال الإجراء بالكامل في ساعة واحدة. الحمض النووي الريبوزي الكلي المعزول بواسطة كاشف TRAzol خالٍ من تلوث البروتين والحمض النووي.

التطبيق
الحمض النووي الريبوزي النقي خالٍ من الشوائب ومثبطات الإنزيمات، ونسبة A260/280 تتراوح بين 1.8-2.0، وهو مناسب لتطبيقات مثل:
تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (RT-PCR)
تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qPCR)
النقل الشمالي (Northern blotting)
فحوصات حماية النوكلياز
تضخيم الحمض النووي الريبوزي لتحليل المصفوفة الدقيقة (microarray analysis)
تحضير مكتبة cDNA بعد اختيار poly(A)+

الميزات
إنتاج مستقر
أداء موثوق به للحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة في التطبيقات اللاحقة