DNase I, RNase-frei, HC

Konzentration: 50 U/µL

Produktbeschreibung
DNase I (ohne RNase) ist eine Endonuklease, die sowohl einzelsträngige als auch doppelsträngige DNA spalten kann. Sie hydrolysiert Phosphodiesterbindungen und erzeugt einzelne Desoxyribonukleotide und Oligodesoxyribonukleotide mit 5'-Phosphatgruppen und 3'-OH-Gruppen.
Die Aktivität dieses Enzyms ist strikt von Ca2+ abhängig und wird durch Mg2+- oder Mn2+-Ionen aktiviert. In Gegenwart von Mg2+ schneidet DNase I jeden Strang der dsDNA statistisch zufällig und unabhängig. Wenn Mn2+ vorhanden ist, schneidet das Enzym nahezu beide DNA-Stränge an derselben Stelle, wodurch DNA-Fragmente mit stumpfen Enden oder Überhängen von einem oder wenigen Nukleotiden entstehen.

Quelle
Rekombinanter E.-coli-Stamm mit dem klonierten Gen, das für bovine DNase I kodiert.

Definition der Einheit

Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 µg Plasmid-DNA innerhalb von 1 Minute bei 37 °C vollständig abzubauen.

Die Enzymaktivität wird in folgendem Reaktionsgemisch bestimmt: 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 25 °C), 2,5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂ und 1 µg pUC19-DNA.

Eine Einheit DNase I entspricht 0,3 Kunitz-Einheiten.

Eigenschaften
- Rekombinantes Enzym
- Aufgereinigt aus einem nicht tierischen Wirt mit geringen Mengen an endogener RNase

Anwendungsbereiche
- Zur Herstellung RNA-freier RNA.
- Zur Entfernung von Template-DNA nach der In-vitro-Transkription.
- Zur Herstellung DNA-freier RNA vor RT-PCR und RT-qPCR.
- Zusammen mit DNA-Polymerase I zur DNA-Markierung durch Nick-Translation.
- Zur Untersuchung von DNA-Protein-Interaktionen mittels DNase-I-(RNase-freiem)-Footprinting.
- Zur Erzeugung einer Bibliothek zufällig fragmentierter DNA-Inserts. Es wird Reaktionspuffer verwendet, der Mn2+ enthält.