Multiplex-Sonden-qPCR-Mix Plus U

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U ist ein 2-fach konzentriertes Premix für die quantitative Echtzeit-PCR mit Sondenmethode. Zur Anwendung müssen lediglich DNA-Template, Primer und Sonde hinzugegeben und die Reaktion angesetzt werden. Dieses Produkt enthält eine durch Antikörpertechnologie modifizierte Hotstart-Taq-DNA-Polymerase. In Kombination mit dem speziellen Echtzeit-PCR-Puffer von GDSBio kann es nicht nur Primerdimere und andere unspezifische Amplifikationen wirksam hemmen, sondern auch die Amplifikationseffizienz verbessern und dadurch Multiplex-qPCR-Reaktionen mit mehreren Sonden ermöglichen. Dieses Reagenz enthält ein dUTP/UDG-Kontaminationsschutzsystem, das vor der PCR-Reaktion PCR-Produkte mit dUTP entfernen kann und dadurch den Einfluss von Kreuzkontaminationen durch Amplifikationsprodukte auf die Quantifizierung wirksam verhindert. Das Produkt ist für die Verwendung mit TaqMan-Sonden und Primern geeignet, um ein vollständig vorgemischtes Master-Mix-Molekulardiagnostik-Kit zu erhalten, und ist vollständig mit gängigen quantitativen PCR-Geräten wie ABI, Roche, Bio-Rad usw. kompatibel. Dieses Produkt kann mit TaqMan- und anderen Fluoreszenzsonden verwendet werden und ist vollständig mit gängigen quantitativen PCR-Geräten wie ABI, Roche, Bio-Rad usw. kompatibel.

Das Reaktionssystem dieses Produkts kann bei Raumtemperatur ohne Kühlbox angesetzt werden. Das vorbereitete PCR-Reaktionssystem kann 24 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahrt werden, ohne dass sich die Amplifikationseffizienz verändert.

Anwendung
Sondenbasierte Genexpressionsanalyse
Nachweis mehrerer Gene mit niedriger Kopienzahl
Validierung von Sonden-Microarrays
Validierung des Gen-Knockdowns mit Sonden

Eigenschaften
Dieses Kit eignet sich für die Multiplex-Fluoreszenzquantifizierung nach der Sondenmethode
Dieses Kit ist mit zahlreichen Echtzeitsystemen kompatibel
Die Hot-Start-Technologie ermöglicht hohe Spezifität und reproduzierbare Amplifikation
dUTP/UDG-System zur wirksamen Vermeidung von PCR-Produktkontaminationen

Unterstützt den schnellen Amplifikationsmodus: Laufzeit <50 min, kontrollierter ∆Ct-Verlust.

OEM verfügbar

Stabilitätstest bei Raumtemperatur:
Unter Verwendung menschlicher genomischer DNA (0,1 ng/µl) als Template wurde mit Multiplex Probe qPCR Mix Plus U ein Gennachweis durchgeführt. Die Abbildungen 1 und 2 zeigen jeweils die nach dem Ansetzen des Reaktionssystems (0 h) und nach 48-stündiger Lagerung bei Raumtemperatur (25 °C) gemessenen Amplifikationskurven (48 h). Gleichzeitig wurde ein Vergleichstest mit einem ähnlichen Produkt des Herstellers T durchgeführt; die Abbildungen 3 und 4 zeigen jeweils die Amplifikationskurven des von Hersteller T angesetzten Systems nach 0 h und 48 h. Es ist erkennbar, dass Multiplex Probe qPCR Mix Plus U auch nach 48 Stunden bei Raumtemperatur eine ausgezeichnete Amplifikationsleistung aufweist.

Test zur Entfernung hochkonzentrierter Kontaminationen (Multiplex-qPCR-System):
In einem Triplex-Fluoreszenzamplifikationssystem wurden absichtlich U-haltige Amplifikate in einer 10⁴-fachen Verdünnung (Konzentration 100a), einer 10⁵-fachen Verdünnung (Konzentration 10a) und einer 10⁶-fachen Verdünnung (Konzentration a) eingebracht, um eine Verschleppungskontamination im Labor zu simulieren. Die Kontaminationsschutzleistung von P2601 (ohne UDG/dUTP-System) wurde direkt mit P2701 (diesem Produkt) verglichen. Parallel wurde eine Negativkontrolle ohne Template (NTC) durchgeführt.

Ergebnisse:
P2601 (Kontrollgruppe – ohne Kontaminationsschutzsystem): Die NTC zeigte keine Amplifikation. Die kontaminierten Kanäle (GAPDH / RPLPO / GUSB) zeigten über alle Verdünnungsstufen hinweg starke Amplifikationssignale, was auf schwere falsch-positive Ergebnisse hinweist.
P2701 (Testgruppe – dieses Produkt): Nach einer 2-minütigen Verdauung bei 37 °C wurden die falsch-positiven Signale in den kontaminierten Kanälen wirksam beseitigt (unterhalb der Nachweisgrenze); die Amplifikationskurven kehrten auf das Basisniveau zurück. Der Ct-Wert für den RPLPO-Nachweis war deutlich verzögert (∆Ct~11), was eine hohe Entfernungseffizienz von bis zu 99,95 % belegt. Im NTC-Kanal wurde keine Amplifikation festgestellt.

Schnellamplifikationstest:

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U unterstützt den schnellen Amplifikationsmodus mit einer Reaktionszeit von <50 Minuten. Dadurch lässt sich die Zeit um >30 % verkürzen; der Ct-Verlust bleibt kontrollierbar und beträgt etwa 1–3,5 Zyklen.

Zielzuweisungsstrategie (Empfehlung): Optimieren Sie bei Multiplex-PCR-Assays die Kanalzuweisung, um kinetische Verluste durch schnelle Zyklen auszugleichen:

ROX-Kanal: Weisen Sie Gene mit hoher Abundanz, hoher Expression oder ohne LoD-Relevanz (Nachweisgrenze) zu.

FAM- oder CY5-Kanäle: Reservieren Sie diese für empfindliche Targets mit extrem niedriger Kopienzahl. Diese Kanäle bleiben von schnellen Protokollen praktisch unbeeinflusst ( ∆Ct ~1).