Multiplex-Sonden-qPCR-Mix Plus U (Low ROX+)

Multiplex Probe qPCR Mix Plus U (Low ROX+) ist ein 2-fach konzentriertes Premix für die quantitative Echtzeit-PCR mit Sondenmethode. Zur Anwendung müssen lediglich die DNA-Vorlage, Primer und Sonde hinzugefügt werden. Dieses Produkt enthält eine durch Antikörpertechnologie modifizierte Hot-Start-Taq-DNA-Polymerase. In Kombination mit dem speziellen Echtzeit-PCR-Puffer von GDSBio kann es nicht nur Primerdimere und andere unspezifische Amplifikationen wirksam hemmen, sondern auch die Amplifikationseffizienz verbessern und dadurch Multiplex-qPCR-Reaktionen mit mehreren Sonden ermöglichen. Dieses Reagenz enthält ein dUTP/UDG-System zur Vermeidung von Kontaminationen, das vor der PCR-Reaktion PCR-Produkte mit dUTP entfernen kann und so den Einfluss von Kreuzkontaminationen durch Amplifikationsprodukte auf die Quantifizierung wirksam verhindert. Das Produkt lässt sich bequem mit TaqMan und Primern zu einem vollständig vorgemischten Master-Mix-Molekulardiagnostik-Kit kombinieren und ist vollständig mit gängigen quantitativen PCR-Geräten wie ABI, Roche, Bio-Rad usw. kompatibel. Das Produkt ist mit einem Referenzfarbstoff ROX in niedriger Konzentration vorgemischt und eignet sich für ABI-, Roche- und andere Fluoreszenz-Quantitative-PCR-Geräte, die zur Kalibrierung ROX in niedriger Konzentration benötigen. Es kann mit TaqMan und anderen Fluoreszenzsonden verwendet werden.

Das Reaktionssystem dieses Produkts kann bei Raumtemperatur ohne Kühlbox angesetzt werden. Das vorbereitete PCR-Reaktionssystem kann 24 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahrt werden, ohne dass sich die Amplifikationseffizienz verändert.

Anwendungen
Analyse der Genexpression mittels Sonden
Nachweis mehrerer Gene mit geringer Kopienzahl
Validierung von Sonden-Microarrays
Validierung des Gen-Knockdowns mittels Sonden

Eigenschaften
Dieses Kit eignet sich für die Multiplex-Fluoreszenzquantifizierung mittels Sondenmethode
Dieses Kit ist mit vielen Echtzeitsystemen kompatibel, die zur Kalibrierung ROX in niedriger Konzentration benötigen
Die Hot-Start-Technologie ermöglicht eine hohe Spezifität und reproduzierbare Amplifikation
dUTP/UDG-System zur wirksamen Vermeidung von PCR-Produktkontaminationen

Schneller Amplifikationsmodus unterstützt: Laufzeit <50 min, kontrollierter ∆Ct-Verlust.

VALIDIERUNGSDATEN
Unter Verwendung menschlicher genomischer DNA (0,1 ng/µl) als Vorlage wurde ein Gennachweis mit Multiplex Probe qPCR Mix Plus U durchgeführt. Die Abbildungen 1 und 2 zeigen jeweils die nach dem Ansetzen des Reaktionssystems (0 h) und nach 48 Stunden bei Raumtemperatur (25°C) (48 h) gemessenen Amplifikationskurven. Gleichzeitig wurde ein Vergleichstest mit einem ähnlichen Produkt des Herstellers T durchgeführt; die Abbildungen 3 und 4 zeigen jeweils die Amplifikationskurven des von Hersteller T angesetzten Systems nach 0 h und 48 h. Tabelle 2 zeigt die Ct-Werte von Multiplex Probe qPCR Mix Plus U und dem Produkt von Hersteller T nach 0 h und 48 h. Daraus ist ersichtlich, dass Multiplex Probe qPCR Mix Plus U auch nach 48 Stunden bei Raumtemperatur weiterhin eine hervorragende Amplifikationsleistung aufweist.

Strategie zur Zielzuweisung (Empfehlung): Optimieren Sie bei Multiplex-PCR-Assays die Kanalzuweisung, um kinetische Verluste durch schnelle Zyklen auszugleichen:

ROX-Kanal: Weisen Sie Gene mit hoher Abundanz, hoher Expression oder oberhalb der Nachweisgrenze (Limit of Detection, LoD) zu.

FAM- oder CY5-Kanäle: Reservieren Sie diese für empfindliche Ziele mit extrem niedriger Kopienzahl. Diese Kanäle bleiben von schnellen Protokollen praktisch unbeeinflusst ( ∆Ct ~1).