Pro-Multiplex-Probe-qPCR-Mix

Pro Multiplex Probe qPCR Mix ist ein 2X Master Mix für die multiplexe quantitative Echtzeit-PCR mit sondengestützter Detektion. Die Reaktion kann einfach durch Zugabe von Template, Primern und Sonden durchgeführt werden. Dieses Produkt enthält ein mutiertes Hot-Start-Enzym, die durch Antikörpertechnologie modifizierte Hotstart-Taq-DNA-Polymerase, kombiniert mit dem speziell formulierten PCR-Puffer von Dongsheng, und ermöglicht dadurch hochempfindliche multiplexe qPCR. Das Reagenz enthält ein dUTP/UDG-Kontaminationsschutzsystem, das dUTP-haltige PCR-Produkte vor der Amplifikation beseitigen kann und dadurch quantitative Beeinträchtigungen durch Kreuzkontamination mit Amplifikationsprodukten wirksam verhindert. Dieses Produkt eignet sich für die Entwicklung vollständig vorgemischter Master-Mix-Kits für die molekulare Diagnostik mit Sonden und Primern. Es ist mit verschiedenen fluoreszenzmarkierten Sonden wie TaqMan kompatibel und funktioniert nahtlos mit gängigen quantitativen PCR-Geräten von Herstellern wie ABI, Roche und Bio-Rad. Mit diesem Produkt kann die Reaktion ohne Eisbox angesetzt werden: PCR Mix, Primer und Template können bei Raumtemperatur vorbereitet werden, und das angesetzte PCR-Reaktionssystem kann 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert werden, ohne dass die Amplifikationseffizienz verloren geht.

Anwendungen

• Sondengestützte Genexpressionsanalyse

• Sondengestützter Nachweis von Genen mit niedriger Kopienzahl

• Multiple sondengestützte qPCR

• Forschung an IVD-Diagnostikkits

Merkmale

• Gebrauchsfertiger 2X Mix für multiple qPCR

• Hohe Sensitivität und Multiplex-Fähigkeit

• Integrierte Kontaminationskontrolle (dUTP/UDG)

• Breite Kompatibilität mit Sonden und Geräten

• 24 Stunden bei Raumtemperatur stabil

Schnellamplifikationsmodus unterstützt: Laufzeit <50 min, kontrollierter ∆Ct-Verlust: ~1 Zyklus

Test der Schnellamplifikation:
In einem direkten Vergleich wurden P2731 und P2701 (sondengestützte qPCR-Mischungen) unter Standard- (S, ~70 min) und Schnellzyklusbedingungen (F, ~48 min) getestet. Während beide Mischungen in den CY5- und FAM-Kanälen einen identischen, minimalen ∆Ct(F-S) von ~1,0 zeigten, wichen sie im ROX-Kanal deutlich voneinander ab. Aufgrund der hohen Temperaturanstiegsraten, die die Sondenhybridisierung und die Fluoreszenzerfassung erschweren, stieg der ∆Ct(F-S) im ROX-Kanal bei P2701 auf 3,6, blieb bei P2731 jedoch mit 2,3 eng kontrolliert. Diese Ergebnisse belegen, dass P2731 eine hervorragende kinetische Pufferwirkung bietet, um Effizienzverluste bei schnellen Zyklen wirksam zu minimieren, und eine überlegene Systemtoleranz aufweist sowie Standardmischungen hinsichtlich der Kompatibilität mit schnellen Programmen übertrifft.

Strategie zur Zielzuweisung (Empfehlung): Optimieren Sie bei Multiplex-PCR-Assays die Kanalzuweisung, um kinetische Verluste bei schnellen Zyklen auszugleichen:

ROX-Kanal: Weisen Sie Gene mit hoher Abundanz, hoher Expression oder ohne LoD (Nachweisgrenze) diesem Kanal zu.

FAM- oder CY5-Kanäle: Reservieren Sie diese für empfindliche Targets mit extrem niedriger Kopienzahl. Diese Kanäle bleiben von schnellen Protokollen praktisch unbeeinflusst ( ∆Ct ~1).