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T4-DNA-Ligase

T4-DNA-Ligase

$56.00 USD
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Spezifikation.

Konzentration: 5 Weiss-Einheiten/µL

T4-DNA-Ligase katalysiert die Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen benachbarten 5'-Phosphat- und 3'-Hydroxyltermini in doppelsträngiger DNA oder RNA. Dieses Enzym kann Einzelstrang-Nicks in doppelsträngiger DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden reparieren und DNA-Fragmente mit klebrigen oder stumpfen Enden verbinden, ist jedoch auf einzelsträngigen Nukleinsäuren inaktiv.

T4-DNA-Ligase benötigt ATP als Kofaktor.

Quelle
Rekombinanter E.-coli-Stamm, der das aus dem Bakteriophagen T4 klonierte Gen 30 enthält.

Einheitendefinition

Bei 37°C, 1 Weiss-Einheit des Enzyms katalysiert die Umwandlung von 1 nmol [32PPi] innerhalb von 20 Minuten in einen aktivierte-Kohlenstoff-Adsorptionszustand umsetzt.

Die Enzymaktivität wird in folgendem Gemisch bestimmt: 66 mM Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM MgCl2, 0,066 mM ATP, 10 mM DTT, 3,3 μM [32P]Orthophosphat (PPi).

Eine Weiss-Einheit entspricht etwa 200 Cohesive-End-Ligation-Einheiten (CEU), was der Anzahl an HindIII-verdauten DNA-Fragmenten entspricht, die innerhalb von 30 Minuten bei 16°C. λ DNA-Fragmente.

Anwendungsbereich
- Durch Restriktionsenzyme erzeugte DNA-Fragmente
- Klonierte PCR-Produkte
- Ligation doppelsträngiger Oligonukleotide oder Adapter an DNA
- Gerichtete Mutagenese
- Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP)
- Ligase-vermittelter RNA-Nachweis
- Nick-Reparatur in doppelsträngiger DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
- Selbstzirkularisierung linearer DNA

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