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T4-DNA-Ligase, HC

T4-DNA-Ligase, HC

$531.00 USD
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Spezifikation.

Konzentration: 30 Weiss-U/µL

T4-DNA-Ligase katalysiert die Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen benachbarten 5'-Phosphat- und 3'-Hydroxylenden in doppelsträngiger DNA oder RNA. Dieses Enzym kann Einzelstrangbrüche in doppelsträngiger DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden reparieren und DNA-Fragmente mit überhängenden oder stumpfen Enden verbinden, ist jedoch bei einzelsträngigen Nukleinsäuren inaktiv.

T4-DNA-Ligase benötigt ATP als Kofaktor.

Quelle
Rekombinanter E.-coli-Stamm mit dem aus dem Bakteriophagen T4 klonierten Gen 30.

Einheitsdefinition

Bei 37°C, 1 Weiss-Einheit des Enzyms katalysiert die Umwandlung von 1 nmol [32PPi] innerhalb von 20 Minuten in einen Adsorptionszustand an Aktivkohle umwandelt.

Die Enzymaktivität wird in folgender Mischung bestimmt: 66 mM Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM MgCl2, 0,066 mM ATP, 10 mM DTT, 3,3 μM [32P]Orthophosphat (PPi).

Eine Weiss-Einheit entspricht ungefähr 200 Ligationseinheiten für kohäsive Enden (CEU), was der Anzahl der mit HindIII verdauten DNA-Fragmente entspricht, die innerhalb von 30 Minuten bei 16°C. λ-DNA-Fragmente.

Anwendungsbereich
- Durch Klonierungs-Restriktionsenzyme erzeugte DNA-Fragmente
- Klonierte PCR-Produkte
- Ligation doppelsträngiger Oligonukleotide oder Adapter an DNA
- Gerichtete Mutagenese
- Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP)
- Ligasevermittelte RNA-Detektion
- Reparatur von Einzelstrangbrüchen in doppelsträngiger DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
- Selbstzirkularisierung linearer DNA

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