T4-RNA-Ligase

Konzentration: 10 U/µL 

T4-RNA-Ligase katalysiert die ATP-abhängige Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen 5'-Phosphatgruppen und 3'-Hydroxylenden von Oligonukleotiden, einzelsträngiger RNA und DNA sowohl intermolekular als auch intramolekular.

Mindestsubstrate: ein Nukleotid-3',5'-phosphat bei intermolekularen Reaktionen und ein Oligonukleotid mit 8 Nukleotiden bei intramolekularen Reaktionen.

Quelle
Der rekombinante E.-coli-Stamm enthält das Gen 63, das aus dem Bakteriophagen T4 kloniert wurde.

Einheitsdefinition

Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um die Umwandlung von 1 nmol 5'-[³²P]-(A)_12-18 innerhalb von 30 Minuten bei 37 °C in seine säureresistente Form.

Die Enzymaktivität wird in folgendem Gemisch bestimmt: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 1 mM ATP und 10 µM 5'-[³²P]-(A)_12-18 (10 µM am 5'-Terminus).

Anwendungsbereich
- RNA-Markierung am 3'-Terminus (unter Verwendung von Cytidin 3',5'-di[α-³²P]phosphat)
- RNA-zu-RNA-Ligation
- Synthese von Oligoribonukleotiden und Oligodesoxyribonukleotiden
- Spezifische Modifikation von tRNA
- Ligation von Oligodesoxynukleotiden an einzelsträngige cDNA für 5' RACE (schnelle Amplifikation von cDNA-Enden)
- Standortspezifische Erzeugung von PCR-Primerkomplexen