Thermosensitive alkalische Phosphatase

Konzentration: 1 U/µL

Thermosensitive alkalische Phosphatase ist eine neuartige alkalische Phosphatase, die sowohl in häufig verwendeten Puffern für Restriktionsendonukleasen als auch in PCR-Puffern aktiv ist. Dieses Enzym katalysiert die Freisetzung von 5'- und 3'-Phosphatgruppen aus DNA, RNA und Nukleotiden. Zusätzlich kann es Phosphatgruppen von Proteinen entfernen. Thermosensitive alkalische Phosphatase kann alle Arten von DNA-Enden innerhalb von 10 Minuten bei 37 °C dephosphorylieren. Das Enzym wird innerhalb von 5 Minuten bei 75 °C durch Hitze inaktiviert. Daher muss die alkalische Phosphatase vor der Ligation nicht entfernt werden.

Quelle
Rekombinanter E.-coli-Stamm, der das aus Bakterien klonierte Gen für die alkalische Phosphatase enthält.

Definition der Einheit
Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um die 5'-Enden von 1 μg linearisierter pUC57-DNA in DSAP-Puffer innerhalb von 10 Minuten bei 37 °C zu dephosphorylieren.

Anwendungsbereiche
- Dephosphorylierung von klonierter Vektor-DNA, um eine Rekircularisierung während der Ligation zu verhindern.
- Gleichzeitige enzymatische Spaltung und Dephosphorylierung von Vektor-DNA.
- Aufreinigung von PCR-Produkten: Abbau von Nukleotiden in PCR-Produkten vor der Sequenzierung.
- Dephosphorylierung der 5'-Enden von Nukleinsäuren vor der Markierung mit T4-Polynukleotidkinase.
- Weitere Anwendungen, die eine Dephosphorylierung von DNA- und RNA-Substraten erfordern.
- Dephosphorylierung von Proteinen.