TRAzol-Reagenz

TRAzol Reagent ist ein gebrauchsfertiges Reagenz zur Isolierung von Gesamt-RNA aus Zellen und Gewebe. Das Reagenz, eine einphasige Lösung aus Phenol und Guanidinisothiocyanat, stellt eine Weiterentwicklung der einstufigen Methode zur RNA-Isolierung dar. Während der Homogenisierung oder Lyse der Probe bewahrt TRAzol Reagent die Integrität der RNA, während es Zellen aufschließt und Zellbestandteile löst. Die Zugabe von Chloroform mit anschließender Zentrifugation trennt die Lösung in eine wässrige und eine organische Phase. Die RNA verbleibt ausschließlich in der wässrigen Phase. Nach Überführung der wässrigen Phase wird die RNA durch Fällung mit Isopropylalkohol gewonnen. Nach Entfernung der wässrigen Phase können die DNA und Proteine in der Probe durch eine sequenzielle Fällung gewonnen werden. Die Fällung mit Ethanol ergibt DNA aus der Interphase, und eine zusätzliche Fällung mit Isopropylalkohol ergibt Proteine aus der organischen Phase.

Die Kopurifizierung der DNA kann für die Normalisierung der RNA-Ausbeuten von Probe zu Probe nützlich sein. Diese Technik eignet sich sowohl für kleine Gewebemengen (50–100 mg) und Zellmengen (5x10^6) als auch für große Gewebemengen (>1 g) und Zellmengen (>10^7) menschlichen, tierischen, pflanzlichen oder bakteriellen Ursprungs. Die einfache Durchführung der TRAzol-Reagent-Methode ermöglicht die gleichzeitige Verarbeitung einer großen Anzahl von Proben. Das gesamte Verfahren kann innerhalb einer Stunde abgeschlossen werden. Die mit TRAzol Reagent isolierte Gesamt-RNA ist frei von Protein- und DNA-Verunreinigungen.

Anwendung
Die gereinigte RNA ist frei von Verunreinigungen und Enzyminhibitoren und weist ein A260/280-Verhältnis von 1.8–2.0 auf. Sie eignet sich für Anwendungen wie:
Reverse-Transkriptase-PCR (RT-PCR)
Echtzeit-quantitative PCR (qPCR)
Northern-Blotting
Nuklease-Schutz-Assays
RNA-Amplifikation für die Mikroarray-Analyse
Herstellung von cDNA-Bibliotheken nach der Poly(A)+-Selektion

Eigenschaften
Stabile Ausbeute
Zuverlässige Leistung hochwertiger gereinigter Gesamt-RNA in nachgelagerten Anwendungen